湖南蛋白純化生產廠家
發布時間:2022-12-23 01:56:37湖南蛋白純化生產廠家
樣品的組份應滿足層析工藝且對層析填料的性能沒有影響,必要時可以用藍曉科技的凝膠過濾介質Seplife G-25 M介質對樣品進行置換體系處理。
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Seplife?IEX離子交換層析填料是采用獨有的聚合物合成技術制備出以聚甲基丙烯酸酯為骨架的微球。該聚合物微球經過表面親水性改造以增加親水性,再通過化學合成的方法鍵合不同的離子交換基團。由于其良好的親水性和較好的物理、化學穩定性及剛性結構,使得離子交換層析填料具有良好的生物相溶性及使用壽命,并提高純化效率。
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1、樣品中含有8M尿素(6M鹽酸胍)——Ni Seplife FF(NTA),IDA耐受性差,TED結合力弱,在含有高濃度尿素時結合效率差,所以含有變性劑的樣品首選IMAC的鎳柱。2、含有Cys/Try殘基蛋白——含有Cys/Try 殘基的蛋白和鎳層析填料的結合力弱,此時可以選擇IMAC Seplife FF(IAD)的填料螯合Cu離子進行親和純化(如烏司他丁可用此填料純化)
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反壓大,流速慢:凝膠過濾層析柱的裝填應控制在60-100cm,太低影響分離度,太高反壓增大。另外層析填料的清潔程度及樣品的粘度,pH,離子強度也會影響液流速度。Protein A是金黃色葡萄球菌表面的蛋白,分子量42kDa,有5個不同的結構域可以結合IgG的Fc片段,具有很強的特異性親和力,每個Protein A分子至少可以結合兩個IgG分子。隨著技術的發展,重組Protein A在不斷的改進,目前用于單抗捕獲的rProtein A多點和瓊脂糖微球等層析填料基質偶聯,減少了使用過程中配基脫落,同時為滿足生物制藥工藝消毒的要求,可以耐受0.1-0.5M氫氧化鈉的處理。