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發(fā)布時間:2023-02-04 01:56:13寧夏層析填料聯系電話地址
DEAE-52和DEAE-FF有什么區(qū)別:兩者都是弱陰離子填料。DEAE-52是纖維素基質,平均粒徑50um,DEAE-FF是瓊脂糖基質,中心粒徑90um。同樣的上樣流速前者反壓明顯大于后者,無法滿足工業(yè)化生產需求,現在市面上很少有提供DEAE-52的,工業(yè)化生產都在用DEAE-FF或者更高剛性的,兩者選擇的話,強烈推薦使用DEAE-FF。
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洗脫峰雜質多,可能原因:非特異性結合,清洗不徹底,降解等。解決方法:蛋白純化過程加蛋白抑制劑防止降解,上樣完后要徹底清洗,加一定的NaCl和咪唑減少非特異性結合。使用幾次后,介質結合效率降低,柱效降低。可能原因:介質上沉積大量雜質等。解決方法:徹底清洗,IDA/IMAC脫鎳再生處理。
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紅色染料親和層析介質:紅色染料親和介質是將活性紅120共價結合到高流速瓊脂糖凝膠微球上的一種親和層析介質,活性紅120是一個多環(huán)染料,與自然產生的NADP+具有某些結構的相似性,可以強烈并且特異性結合寬范圍的蛋白質,如乳酸脫氫酶。能與紅色染料特異性結合的蛋白是由于它們需要核苷酸輔助因子。其他一些蛋白,例如白蛋白,脂蛋白,凝血因子和干擾素,是以非特異性方式與紅色染料相結合的,如芳香環(huán)陰離子配基的靜電力相互作用或者疏水鍵的相互作用。
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建立蛋白質純化工藝時,最重要的是需要考慮純化得到的蛋白質應能滿足其后續(xù)應用要求。蛋白質的含量及純度都必須滿足應用要求。而且,因為后續(xù)應用需要的是保持良好折疊結構的活性蛋白質,因此蛋白質活性的相關信息也需要考慮。在純化及后續(xù)的保存過程中,很多處理方法都會對蛋白質的性質產生影響,如蛋白質的去折疊、聚集、降解和失活等。制定詳細計劃,在最短時間內完成蛋白質純化,并在最穩(wěn)定的條件下進行保存才算是成功地完成了其整個純化過程。