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發布時間:2023-05-02 01:49:41河南蛋白純化聯系電話地址
層析介質壽命驗證的原則:壽命驗證實驗設計必須能夠完全反映商業化生產規模的性能。壽命驗證實驗必要體現商業化生產規模之間的相關性。a.在設計小試驗證實驗時需保證層析過程放大因素和中試及生產規模保持一致的因素完全一致,可根據層析過程中的可線性方大因素設計試驗規模及層析柱和層析系統的選型。b.避免層析過程影響因素對結果的影響。設計小試實驗室必須在生產所要求的環境溫度及潔凈車間進行,并且嚴格執行過程SOP,且要對過程進行可靠的監管。
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慢病毒純化相關層析介質:每一步工序后,在開始下一步工序都要考慮病毒粒子濃度及緩沖液體系的匹配性,必要的情況下都要進行超濾過程調整病毒粒子濃度及置換緩沖液。層析過程中,體系pH7.0-9.0更利于HCP和多模式及陰離子交換介質的結合。
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樣品的組份應滿足層析工藝且對層析填料的性能沒有影響,必要時可以用藍曉科技的凝膠過濾介質Seplife G-25 M介質對樣品進行置換體系處理。
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在層析過程要對樣品做足夠的認知,包括樣品的濃度,樣品的組成等做一定的了解,如真核細胞分泌表達的樣品,要了解其上游工藝,培養基組成,培養過程等的一些添加劑是否對填料的性能及壽命衰減會有影響,及樣品的酸堿度,離子強度,濁度等做足夠的了解,必要的時候要進行再次澄清處理及體系置換。
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溶菌緩沖液和純化工藝的前期步驟中常常會添加蛋白酶抑制劑以防止目標蛋白質被內源性蛋白酶酶解。而純化工藝的后期一般不用再添加這些蛋白酶抑制劑,因為此時幾乎所有的蛋白酶都已經從目標蛋白質分離出去。蛋白質的保存緩沖液中通常要添加金屬螯合劑,如EDTA或EGTA。這些金屬螯合劑與 Mg2+結合以防止目標蛋白質被所含的金屬蛋白酶分解。還有一些其他的添加劑,主要是用來保護蛋白質不被破壞和增強其溶解性。