重慶層析介質(zhì)聯(lián)系電話地址
發(fā)布時間:2022-07-30 01:58:45重慶層析介質(zhì)聯(lián)系電話地址
隨著生物制藥工業(yè)的發(fā)展,各個廠家對下游工藝純化生產(chǎn)效率的要求逐漸提高。在實際生產(chǎn)過程中,具有高耐受壓力,高流速的分離介質(zhì)更具有優(yōu)勢。因此,近年來剛性結(jié)構(gòu)的層析填料在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用越來越多,在某些產(chǎn)品的純化中更優(yōu)于傳統(tǒng)的瓊脂糖葡聚糖類介質(zhì)。Seplife HM系列層析填料通過在特有的剛性骨架基礎(chǔ)上,對表面進(jìn)行親水改造,基團(tuán)鍵合等技術(shù),使填料具有親水性好,載量高,使用壽命長,流速高等特點,與傳統(tǒng)層析填料相比,可大大提高下游純化工藝的生產(chǎn)效率,降低成本,創(chuàng)造出較好的經(jīng)濟(jì)效益。
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蛋白質(zhì)純化工藝中的其他因素也會對蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性產(chǎn)生影響。對蛋白質(zhì)的處理步驟越少越好,在最短時間內(nèi)采用最少步驟的純化工藝才能保證得到最高產(chǎn)率的活性蛋白質(zhì)。而且,在整個純化過程中,蛋白質(zhì)最好都保持在低溫狀態(tài)。一般純化過程都在4°C進(jìn)行,因為這個溫度既可以降低酶解速度(在含有蛋白酶的情況下),又可以保證蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)完整性。
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層析體系需要優(yōu)化,緩沖體系的pH要在7.5-8.3之間,添加200-500mM氯化鈉減少非特異性吸附,上樣完后要徹底清洗,保證層析填料孔內(nèi),顆粒間未結(jié)合的蛋白全部洗出后,在開始洗脫,保證上完樣后,清洗在10CV以上。洗脫過程需要摸索咪唑的強度梯度,用連續(xù)咪唑梯度來摸索洗脫濃度。
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在了解完樣品的情況后,結(jié)合層析工藝,對樣品做適當(dāng)?shù)那疤幚?,可以有效降低介質(zhì)的壽命衰減。樣品中的顆粒物質(zhì)在層析前要進(jìn)行澄清處理,澄清處理的越徹底,對層析填料壽命衰減影響越小。樣品的粘度要盡量小,必要時候要加核酸酶處理,降低大片段核酸含量及粘度。
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表達(dá)體系對蛋白純化的影響:開始純化蛋白前應(yīng)先制備初始樣品。真正進(jìn)行蛋白純化的操作之前,首要考慮是目的蛋白的來源。樣品來源可為原始樣品,例如肝臟,肌肉或腦組織。當(dāng)前,更為常見的是從重組來源的樣品純化蛋白質(zhì)。
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層析填料被污染或老化:隨著填料的使用,一些雜質(zhì)的積累會使層析填料的孔徑發(fā)生變化(如堵塞,非特異性吸附積累,微生物污染,破碎等),導(dǎo)致其排阻能力發(fā)生偏差而影響分離度。此時可對填料進(jìn)行CIP清洗,若清洗后還不能達(dá)到分離要求,就要更換新的填料。