四川層析介質產地貨源公司
發布時間：2022-08-12 01:58:44
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親和層析介質是一種根據生物分子之間的特異相互作用來分離蛋白的層析方法，如酶和底物、受體和配體、抗體和抗原。這種作用是特異性的也是可逆的，通過這種可逆的結合和分離來達到蛋白純化的目的
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疏水作用層析（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是根據分子表面疏水性差別來分離蛋白質和多肽等生物大分子的一種較為常用的方法。由于蛋白質空間結構受到不同緩沖液環境的影響，而發生立體結構發生改變。疏水層析填料利用這種結構的改變，在含鹽的水溶液體系中，借助于層析填料與蛋白質分子之間的疏水作用達到吸附活性蛋白分子的目的，這種層析技術稱為疏水作用層析。
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1987年Hochulietal.發現帶有相連組氨酸的多肽和Ni2+-NTA介質作用力更強于普通的肽，1988年他第1次用這樣的方法純化了帶六個組氨酸標簽的多肽，無論是在天然還是變性條件下一次親和純化都得到很好效果，此后表達帶六個組氨酸標簽的蛋白配合IMAC變得非常普遍，相對而言，不帶標簽的蛋白純化就非常困難，所以表達帶六個組氨酸標簽的蛋白配合IMAC純化變成最常用而且最有效的研究蛋白結構和功能的有力手段。
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隨著生物制藥工業的發展，各個廠家對下游工藝純化生產效率的要求逐漸提高。在實際生產過程中，具有高耐受壓力，高流速的分離介質更具有優勢。因此，近年來剛性結構的層析填料在生物醫藥領域的應用越來越多，在某些產品的純化中更優于傳統的瓊脂糖葡聚糖類介質。Seplife HM系列層析填料通過在特有的剛性骨架基礎上，對表面進行親水改造，基團鍵合等技術，使填料具有親水性好，載量高，使用壽命長，流速高等特點，與傳統層析填料相比，可大大提高下游純化工藝的生產效率，降低成本，創造出較好的經濟效益。
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一些重要決定需要提前考慮以便優化后續的純化。研究者需要考慮蛋白質的最終用途（例如治療性生物藥，酶測定，結構研究，抗體生成），因為這將決定最終蛋白質制備所需的量和純度。盡管蛋白質表達的詳細討論超出本文范圍，但是在這一點上仍有幾個值得考慮的基本點，因為它們直接影響后續的蛋白純化。
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層析體系需要優化，緩沖體系的pH要在7.5-8.3之間，添加200-500mM氯化鈉減少非特異性吸附，上樣完后要徹底清洗，保證層析填料孔內，顆粒間未結合的蛋白全部洗出后，在開始洗脫，保證上完樣后，清洗在10CV以上。洗脫過程需要摸索咪唑的強度梯度，用連續咪唑梯度來摸索洗脫濃度。