天津?qū)游鎏盍仙a(chǎn)廠家
發(fā)布時(shí)間：2022-08-14 01:58:41
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GST標(biāo)簽蛋白純化親和層析介質(zhì)：谷胱甘肽配基是通過12個(gè)原子連接臂偶聯(lián)到4%的高流速瓊脂糖層析介質(zhì)上，這種偶聯(lián)使得介質(zhì)對(duì)GST-tag融合蛋白和其他谷胱甘肽結(jié)合蛋白有更強(qiáng)的結(jié)合能力，介質(zhì)的高蛋白載量和良好的流速性能使大規(guī)模生產(chǎn)簡單直接。
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生物分子與親和層析介質(zhì)上的配體通過共價(jià)鍵、范德華力、疏水力、靜電力等作用發(fā)生生物學(xué)專一性結(jié)合形成復(fù)合物，共價(jià)鏈接在載體表面的功能團(tuán)配體上。蛋白質(zhì)親和層析技術(shù)通過目標(biāo)蛋白質(zhì)與配體間通過特異性親和力吸附而達(dá)到分離純化的目的，具有生物專一性的特點(diǎn)，純化效率高。親和層析是一種根據(jù)生物分子之間的特異相互作用來分離蛋白的層析方法，如酶和底物、受體和配體、抗體和抗原。這種作用是特異性的也是可逆的，通過這種可逆的結(jié)合和分離來達(dá)到蛋白純化的目的。
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洗脫峰雜質(zhì)多，可能原因：非特異性結(jié)合，清洗不徹底，降解等。解決方法：蛋白純化過程加蛋白抑制劑防止降解，上樣完后要徹底清洗，加一定的NaCl和咪唑減少非特異性結(jié)合。使用幾次后，介質(zhì)結(jié)合效率降低，柱效降低。可能原因：介質(zhì)上沉積大量雜質(zhì)等。解決方法：徹底清洗，IDA/IMAC脫鎳再生處理。
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His-Tag純化時(shí)金屬螯合介質(zhì)的選擇：1、科研微量制備——Ni Seplife HP（IDA)，此層析填料分辨率高，科研微量制備可用此填料純化，純度更高。2、樣品中含有DTT或EDTA——Ni Seplife FF(TED),此填料可以耐受100mM的EDTA及10mM的DTT,樣品中含有EDTA及DTT時(shí)無需換液直接過鎳柱純化。3、樣品中含有8M尿素（6M鹽酸胍）——Ni Seplife FF(NTA),IDA耐受性差，TED結(jié)合力弱，在含有高濃度尿素時(shí)結(jié)合效率差，所以含有變性劑的樣品首選IMAC的鎳柱。
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隨著生物制藥工業(yè)的發(fā)展，各個(gè)廠家對(duì)下游工藝純化生產(chǎn)效率的要求逐漸提高。在實(shí)際生產(chǎn)過程中，具有高耐受壓力，高流速的分離介質(zhì)更具有優(yōu)勢(shì)。因此，近年來剛性結(jié)構(gòu)的層析填料在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用越來越多，在某些產(chǎn)品的純化中更優(yōu)于傳統(tǒng)的瓊脂糖葡聚糖類介質(zhì)。Seplife HM系列層析填料通過在特有的剛性骨架基礎(chǔ)上，對(duì)表面進(jìn)行親水改造，基團(tuán)鍵合等技術(shù)，使填料具有親水性好，載量高，使用壽命長，流速高等特點(diǎn)，與傳統(tǒng)層析填料相比，可大大提高下游純化工藝的生產(chǎn)效率，降低成本，創(chuàng)造出較好的經(jīng)濟(jì)效益。
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慢病毒純化相關(guān)層析介質(zhì)：每一步工序后，在開始下一步工序都要考慮病毒粒子濃度及緩沖液體系的匹配性，必要的情況下都要進(jìn)行超濾過程調(diào)整病毒粒子濃度及置換緩沖液。層析過程中，體系pH7.0-9.0更利于HCP和多模式及陰離子交換介質(zhì)的結(jié)合。