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發布時間:2022-08-17 01:58:42山東層析介質聯系電話地址
GST標簽蛋白純化親和層析介質:谷胱甘肽配基是通過12個原子連接臂偶聯到4%的高流速瓊脂糖層析介質上,這種偶聯使得介質對GST-tag融合蛋白和其他谷胱甘肽結合蛋白有更強的結合能力,介質的高蛋白載量和良好的流速性能使大規模生產簡單直接。
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1987年Hochulietal.發現帶有相連組氨酸的多肽和Ni2+-NTA介質作用力更強于普通的肽,1988年他第1次用這樣的方法純化了帶六個組氨酸標簽的多肽,無論是在天然還是變性條件下一次親和純化都得到很好效果,此后表達帶六個組氨酸標簽的蛋白配合IMAC變得非常普遍,相對而言,不帶標簽的蛋白純化就非常困難,所以表達帶六個組氨酸標簽的蛋白配合IMAC純化變成最常用而且最有效的研究蛋白結構和功能的有力手段。
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高流速瓊脂糖疏水層析介質是將不同性質的疏水基團偶聯到高流速瓊脂糖凝膠過濾層析介質上形成的疏水性層析分離介質,利用生物分子表面的疏水基團與層析介質上的疏水基團相互作用強弱不同進行分離。一般而言,離子強度(鹽濃度)越高,物質所形成的疏水鍵越強。影響疏水作用的因素包括:鹽濃度,溫度,pH,表面活化劑和有機溶劑。高流速瓊脂糖疏水層析介質廣泛應用于生物大分子的純化分離。
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表達體系對蛋白純化的影響:開始純化蛋白前應先制備初始樣品。真正進行蛋白純化的操作之前,首要考慮是目的蛋白的來源。樣品來源可為原始樣品,例如肝臟,肌肉或腦組織。當前,更為常見的是從重組來源的樣品純化蛋白質。
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親和層析捕獲后,進一步用強陽離子交換層析SP Seplife Large Scale層析介質繼續純化捕獲的單抗,進一步去除少量的HCP,HCD及第1步親和層析捕獲時rProtein A親和介質脫離的親和配基rProtein A。強陽離子交換層析后,通過調pH的方式用pH3.7-3.8的環境進行病毒滅活。低pH病毒滅活后,在通過陰離子交換層析Q Seplife Large Scale流穿模式,讓單抗流穿,層析介質吸附痕量的雜質進一步純化。