湖南層析填料批量采購(gòu)供應(yīng)商
發(fā)布時(shí)間：2022-10-21 01:58:09
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1、樣品中含有8M尿素（6M鹽酸胍）——Ni Seplife FF(NTA),IDA耐受性差，TED結(jié)合力弱，在含有高濃度尿素時(shí)結(jié)合效率差，所以含有變性劑的樣品首選IMAC的鎳柱。2、含有Cys/Try殘基蛋白——含有Cys/Try 殘基的蛋白和鎳層析填料的結(jié)合力弱，此時(shí)可以選擇IMAC Seplife FF(IAD)的填料螯合Cu離子進(jìn)行親和純化（如烏司他丁可用此填料純化）
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親和層析介質(zhì)是一種根據(jù)生物分子之間的特異相互作用來分離蛋白的層析方法，如酶和底物、受體和配體、抗體和抗原。這種作用是特異性的也是可逆的，通過這種可逆的結(jié)合和分離來達(dá)到蛋白純化的目的
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金屬螯合親和層析介質(zhì)：組氨酸（His）的殘基上帶有一個(gè)咪唑基團(tuán)，可以和Ni2+,Co2+等過渡金屬離子形成配位鍵而選擇性的結(jié)合在金屬離子上，這些金屬離子能夠用螯合配體固定在層析介質(zhì)上，因此帶有組氨酸標(biāo)簽的蛋白在經(jīng)過裝配了金屬離子的層析介質(zhì)時(shí)可以選擇性的結(jié)合在介質(zhì)上，而其他的雜質(zhì)蛋白則不能結(jié)合或者僅能微弱結(jié)合。結(jié)合在介質(zhì)上的HIS標(biāo)簽蛋白可以通過提高緩沖液中的咪唑濃度進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性洗脫，從而得到較高純度的HIS標(biāo)簽蛋白。
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預(yù)活化介質(zhì)：環(huán)氧活化層析介質(zhì)是將環(huán)氧基團(tuán)鍵合在瓊脂糖FF上形成的一種活性中間體，可直接偶聯(lián)配基制備各類分離介質(zhì)，用于生物大分子純化分離。溴化氫活化瓊脂糖層析介質(zhì)是一種活化后的中間體，通過溴化氫和瓊脂糖上面的羥基反應(yīng)生成活化的氰酸酯基團(tuán)。蛋白質(zhì)，多肽，氨基酸等可以偶聯(lián)到溴化氫活化4B/6B瓊脂糖介質(zhì)上，應(yīng)用較為廣泛。
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His-Tag純化時(shí)金屬螯合介質(zhì)的選擇：1、科研微量制備——Ni Seplife HP（IDA)，此層析填料分辨率高，科研微量制備可用此填料純化，純度更高。2、樣品中含有DTT或EDTA——Ni Seplife FF(TED),此填料可以耐受100mM的EDTA及10mM的DTT,樣品中含有EDTA及DTT時(shí)無需換液直接過鎳柱純化。3、樣品中含有8M尿素（6M鹽酸胍）——Ni Seplife FF(NTA),IDA耐受性差，TED結(jié)合力弱，在含有高濃度尿素時(shí)結(jié)合效率差，所以含有變性劑的樣品首選IMAC的鎳柱。
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一些重要決定需要提前考慮以便優(yōu)化后續(xù)的純化。研究者需要考慮蛋白質(zhì)的最終用途（例如治療性生物藥，酶測(cè)定，結(jié)構(gòu)研究，抗體生成），因?yàn)檫@將決定最終蛋白質(zhì)制備所需的量和純度。盡管蛋白質(zhì)表達(dá)的詳細(xì)討論超出本文范圍，但是在這一點(diǎn)上仍有幾個(gè)值得考慮的基本點(diǎn)，因?yàn)樗鼈冎苯佑绊懞罄m(xù)的蛋白純化。