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遼寧層析介質批發多少錢

發布時間:2022-11-02 01:58:16
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His-Tag融合蛋白是目前最常見的蛋白表達方式,而且很成熟,它的優點是表達方便且不影響蛋白的活性,無論是可溶性表達或者包涵體都可以用固定金屬離子親和層析(IMAC)純化。IMAC是Porathetal.1975年用固定IDA作為配基的介質螯合過渡金屬銅、鎳、鈷或鋅離子,可以吸附純化表面帶組氨酸、色氨酸或半胱氨酸殘基的蛋白。

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His-Tag純化時金屬螯合介質的選擇:1、科研微量制備——Ni Seplife HP(IDA),此層析填料分辨率高,科研微量制備可用此填料純化,純度更高。2、樣品中含有DTT或EDTA——Ni Seplife FF(TED),此填料可以耐受100mM的EDTA及10mM的DTT,樣品中含有EDTA及DTT時無需換液直接過鎳柱純化。3、樣品中含有8M尿素(6M鹽酸胍)——Ni Seplife FF(NTA),IDA耐受性差,TED結合力弱,在含有高濃度尿素時結合效率差,所以含有變性劑的樣品首選IMAC的鎳柱。

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金屬螯合親和層析介質:組氨酸(His)的殘基上帶有一個咪唑基團,可以和Ni2+,Co2+等過渡金屬離子形成配位鍵而選擇性的結合在金屬離子上,這些金屬離子能夠用螯合配體固定在層析介質上,因此帶有組氨酸標簽的蛋白在經過裝配了金屬離子的層析介質時可以選擇性的結合在介質上,而其他的雜質蛋白則不能結合或者僅能微弱結合。結合在介質上的HIS標簽蛋白可以通過提高緩沖液中的咪唑濃度進行競爭性洗脫,從而得到較高純度的HIS標簽蛋白。

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紅色染料親和層析介質:紅色染料親和介質是將活性紅120共價結合到高流速瓊脂糖凝膠微球上的一種親和層析介質,活性紅120是一個多環染料,與自然產生的NADP+具有某些結構的相似性,可以強烈并且特異性結合寬范圍的蛋白質,如乳酸脫氫酶。能與紅色染料特異性結合的蛋白是由于它們需要核苷酸輔助因子。其他一些蛋白,例如白蛋白,脂蛋白,凝血因子和干擾素,是以非特異性方式與紅色染料相結合的,如芳香環陰離子配基的靜電力相互作用或者疏水鍵的相互作用。

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CHO細胞培養后先經過離心的方式去除細胞及細胞碎片,也可用微濾或者深層過濾的方式去除細胞及細胞碎片。去除細胞和細胞碎片后用rProtein A親和層析介質經親和層析捕獲,把單抗從培養液中快速的捕獲出來,此步驟可以去除大量的HCP,單抗去折疊片段,病毒及HCD和培養基組份物質。

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