上海蛋白純化聯(lián)系電話地址
發(fā)布時(shí)間：2022-12-02 01:57:29
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在生物制藥、結(jié)構(gòu)研究、體外生物化學(xué)分析等很多應(yīng)用中都需要進(jìn)行蛋白質(zhì)等生物分子純化。蛋白質(zhì)可以從組織中獲取，亦或更經(jīng)常的是從模式生物中過量表達(dá)獲得，如細(xì)菌、酵母或哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)等。蛋白質(zhì)純化主要是根據(jù)它們理化性質(zhì)的差異來從原料種進(jìn)行分離純化，其目的就是獲得最多且高純度的功能蛋白質(zhì)。一個(gè)好的蛋白質(zhì)的純化過程必須要將其純化工藝步驟優(yōu)化至最少。
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His-Tag純化時(shí)金屬螯合介質(zhì)的選擇：1、科研微量制備——Ni Seplife HP（IDA)，此層析填料分辨率高，科研微量制備可用此填料純化，純度更高。2、樣品中含有DTT或EDTA——Ni Seplife FF(TED),此填料可以耐受100mM的EDTA及10mM的DTT,樣品中含有EDTA及DTT時(shí)無需換液直接過鎳柱純化。3、樣品中含有8M尿素（6M鹽酸胍）——Ni Seplife FF(NTA),IDA耐受性差，TED結(jié)合力弱，在含有高濃度尿素時(shí)結(jié)合效率差，所以含有變性劑的樣品首選IMAC的鎳柱。
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Plasmid Seplife LX，絲氨酸蛋白酶純化親和層析介質(zhì)：苯甲脒類物質(zhì)是絲氨酸蛋白酶的廣譜抑制劑，將這類物質(zhì)偶聯(lián)到高流速瓊脂糖凝膠過濾層析介質(zhì)上，可以從各種來源的樣品中進(jìn)一步胰蛋白酶，凝血酶，尿激酶，激肽釋放酶，前激肽釋放酶等絲氨酸蛋白酶。
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層析填料被污染或老化：隨著填料的使用，一些雜質(zhì)的積累會(huì)使層析填料的孔徑發(fā)生變化（如堵塞，非特異性吸附積累，微生物污染，破碎等），導(dǎo)致其排阻能力發(fā)生偏差而影響分離度。此時(shí)可對(duì)填料進(jìn)行CIP清洗，若清洗后還不能達(dá)到分離要求，就要更換新的填料。
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如果選擇大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，最終目的可溶性表達(dá)或包涵體形式，由于包涵體中有高豐度的重組蛋白，包涵體的分離本身構(gòu)成了純化的重要步驟; 這必須與溶解難易和隨后包涵體中再折疊靶蛋白的難易以及可溶性蛋白的最終產(chǎn)量相平衡 。已經(jīng)有許多工作優(yōu)化了從包涵體中產(chǎn)生功能蛋白的產(chǎn)量 。
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用Seplife Suncore 700多模式層析介質(zhì)進(jìn)行粗純，小于700KD的HCP,HCD，培養(yǎng)基組分等物質(zhì)進(jìn)入多模式介質(zhì)的活性內(nèi)核區(qū)域，和介質(zhì)以靜電力，疏水作用，范德華力等結(jié)合，而慢病毒由于分子尺寸大，被排阻在介質(zhì)的惰性層以外流穿而過，從而實(shí)現(xiàn)分離。