2019年12月新冠（COVID-19）疫情爆發(fā)，疫情發(fā)生之初，中國科研攻關(guān)組就將疫苗的研發(fā)作為主攻方向之一，為了更大限度的提升疫苗研發(fā)的成功率，在梳理分析不同的技術(shù)基礎(chǔ)和可能性之后，科研攻關(guān)組布局了病毒的滅活疫苗、核酸疫苗、重組蛋白疫苗、腺病毒載體疫苗、減毒流感病毒載體疫苗這樣五條技術(shù)路線。
病毒滅活疫苗是最為成熟的疫苗生產(chǎn)技術(shù)，也是最傳統(tǒng)的經(jīng)典技術(shù)路線：即在體外培養(yǎng)新冠病毒，然后將其滅活，使之沒有毒性，但這些病毒的“尸體”仍能刺激人體產(chǎn)生抗體，使免疫細(xì)胞記住病毒的模樣。
代表企業(yè)：
北京科興中維生物技術(shù)有限公司
北京生物制品研究所有限責(zé)任公司
武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司
中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所（昆明所）
新冠病毒滅活疫苗生產(chǎn)流程主要包括：臨床樣品獲取——穩(wěn)定毒株細(xì)胞培養(yǎng)——病毒收獲及澄清——病毒滅活——純化——無菌處理——制劑——灌裝。
圖1：新冠病毒滅活疫苗生產(chǎn)過程（來源：網(wǎng)絡(luò)）
新冠病毒滅活疫苗下游工藝解決方案
圖2：新冠病毒滅活疫苗下游工藝解決方案（自制）
圖3:Seplife? Suncore 700(多模式復(fù)合型層析）+Seplife 4FF(凝膠過濾層析）串聯(lián)純化新冠病毒滅活疫苗。（自制）
圖4：Seplife large scale Q HP(高剛性高分辨率陰離子交換層析）粗純+Seplife 4FF(凝膠過濾層析）精純新冠病毒滅活疫苗。（自制）
圖5：TFF超濾+Seplife 4FF(凝膠過濾層析）純化新冠病毒滅活疫苗。（自制）
新冠病毒滅活疫苗純化的主要三種工藝路線，當(dāng)然條條大路通羅馬，具體采用那種工藝路線還要根據(jù)實(shí)際情況（硬件設(shè)置，車間設(shè)計(jì)，對每種技術(shù)的掌握程度，成本，經(jīng)濟(jì)效益等）進(jìn)行適當(dāng)?shù)牡恼{(diào)整。
純化過程注意事項(xiàng)：
1.微載體培養(yǎng)是目前公認(rèn)最具發(fā)展前途的一種動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)，其兼具懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)，且容易放大。藍(lán)曉科技的微載體廣泛應(yīng)用在疫苗、單抗、基因治療病毒載體等生物制品的大規(guī)模生產(chǎn)中，藍(lán)曉科技自主研發(fā)的Seplife? LX-MC-dex1細(xì)胞培養(yǎng)微載體幾乎適合所有貼壁細(xì)胞（如Vero、CHO、293T及MDCK等），細(xì)胞可貼附微球 2D 表面生長，1g的Seplife? LX-MC-dex1微載體提供 4400 cm2的表面積給細(xì)胞貼附。
圖6：Seplife? LX-MC-dex1細(xì)胞培養(yǎng)微載體培養(yǎng)效果（來源：藍(lán)曉科技）
2.Seplife? Suncore 700填料是多模式復(fù)合型介質(zhì)，病毒溶液進(jìn)入柱床中，分子尺寸大的病毒顆粒被排阻在填料惰性層外面流穿而過，分子尺寸小的HCP,HCD，內(nèi)毒素等物質(zhì)進(jìn)入到孔內(nèi)和填料以靜電力，疏水作用力等結(jié)合，可以實(shí)現(xiàn)高上樣量，但是部分HCP（如帶正電荷的蛋白）和病毒粒子一起流穿，故這種層析很難實(shí)現(xiàn)高純度，在新冠病毒滅活疫苗純化上還需要配合其它層析（如凝膠過濾層析）一起實(shí)現(xiàn)高效率高純度。
3.多模式復(fù)合型層析高上樣量和高純化效率的病毒純化方式凝膠過濾層析串聯(lián)，即可以實(shí)現(xiàn)高上樣量，又可以實(shí)現(xiàn)高純化倍數(shù)，高純度，合理的搭配可以提高效率，提高品質(zhì)。
4.Seplife 4FF凝膠過濾層析是病毒類疫苗純化最主要最經(jīng)典的方式之一，有超過80%的病毒疫苗采用此方式進(jìn)行純化（如狂犬疫苗，流感疫苗，森林腦炎疫苗等）。同樣新冠疫苗可以經(jīng)過濃縮后直接用Seplife 4FF一步層析純化，也可以先用Seplife large scale Q HP(高剛性高分辨率瓊脂糖微球陰離子交換介質(zhì)）進(jìn)行吸附病毒的方式進(jìn)行粗純及濃縮以減少體積，在配合Seplife 4FF填料純化。
5.Seplife large scale Q HP(高剛性高分辨率瓊脂糖微球陰離子交換介質(zhì)），大多數(shù)病毒包括COVID-19在中性pH環(huán)境中都帶負(fù)電荷，可以用此填料進(jìn)行吸附——洗脫模式粗純。粗純后體積減小，在進(jìn)行Seplife 4FF凝膠過濾層析精純，也可以達(dá)到高效的純化過程。
6.凝膠過濾層析上樣量通常在柱床體積的5%以內(nèi)，為了提高工作效率，Seplife 4FF層析可采用連續(xù)上樣的方式提高工作效率。
7.TFF超濾可實(shí)現(xiàn)縮小體積的作用，同時在濃縮時不斷向原液中添加緩沖液，反復(fù)洗濾即可實(shí)現(xiàn)濃縮又可實(shí)現(xiàn)粗純的目的，但是TFF使用時相比層析技術(shù)有比較高的剪切力，所以還需要全面權(quán)衡選擇合適的方法。TFF結(jié)合Seplife 4FF是病毒類生物制品純化的經(jīng)典工藝技術(shù)，但是需要綜合考慮經(jīng)濟(jì)效益，全球新冠疫情仍在蔓延，人類對高品質(zhì)疫苗的迫切需求，促使當(dāng)前疫苗制備過程中收率的格外重要，TFF過程中會損失部分收率，故當(dāng)前特殊時期，新冠滅活疫苗采用圖4和圖5的工藝過程更多一些。
一家之言，難免疏誤！請您指正！
新冠病毒滅活疫苗純化介質(zhì)
Seplife 4FF
Seplife large scale Q HP
Seplife? Suncore 700
細(xì)胞培養(yǎng)微載體
Seplife? LX-MC-dex1
蘇州藍(lán)曉生物科技有限公司，生物制藥下游工藝解決方案專業(yè)供應(yīng)商！
—— 代表產(chǎn)品 ——
?高流速瓊脂糖介質(zhì)
離子交換填料：DEAE/Q/CM/SP seplife? FF等
凝膠過濾填料：seplife? 4FF/6FF等
疏水填料：Phenyl/Butyl seplife? FF等
親和填料：Ni/Blue/rProtein A seplife? FF等
?超高載量瓊脂糖介質(zhì)
DEAE/Q/CM/SP seplife? XL等
?葡聚糖介質(zhì)
凝膠過濾填料：seplife? G25/G50/G75等
離子交換填料：DEAE/Q seplife? A25/A50等
CM/SP seplife? C25/C50等
?高剛性瓊脂糖介質(zhì)
seplife? large scale Q/SP/DEAE等
?聚合物介質(zhì)
seplife?RP/IEX/HIC等
?多模式介質(zhì)
seplife? large scale MMC/MMC(Ⅱ）等
seplife? large Suncore 700等
seplife? LH-20等
?細(xì)胞培養(yǎng)微載體
seplife? LX-MC-dex 1等
?核酸固相合成載體
交聯(lián)苯乙烯（羥基、氨基）等
?多肽合成載體
Merrifield樹脂/Wang 樹脂等
?酶固定化載體
seplife? LX-505P/LX-1000EP/EP200等
現(xiàn)高流速瓊脂糖介質(zhì)，超高載量瓊脂糖介質(zhì)，高剛性瓊脂糖介質(zhì)，葡聚糖介質(zhì)，單分散聚合物介質(zhì)，多模式介質(zhì)，細(xì)胞培養(yǎng)微載體，核酸固相合成載體，多肽固相合成載體，酶固定化載體等年產(chǎn)均超過50000升。
蘇州市工業(yè)園區(qū)裕新路108號
0512-65160522
seplife@sunresin.com
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