用蘇州藍(lán)曉生物科技的Seplife? LX-MC-dex1微載體培養(yǎng)MDCK細(xì)胞。微載體培養(yǎng)是目前公認(rèn)最具發(fā)展前途的一種動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)，其兼具懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)，且容易放大。藍(lán)曉科技的微載體廣泛應(yīng)用在疫苗、單抗、基因治療病毒載體等生物制品的大規(guī)模生產(chǎn)中，藍(lán)曉科技自主研發(fā)的Seplife? LX-MC-dex1細(xì)胞培養(yǎng)微載體幾乎適合所有貼壁細(xì)胞（如Vero、CHO、293T及MDCK等），細(xì)胞可貼附微球 2D 表面生長(zhǎng)，1g的Seplife? LX-MC-dex1微載體提供 4400 cm2的表面積給細(xì)胞貼附。

圖1：Seplife? LX-MC-dex1細(xì)胞培養(yǎng)微載體培養(yǎng)效果（來(lái)源：藍(lán)曉科技）

02、固液分離

細(xì)胞培養(yǎng)后，先經(jīng)過(guò)離心的方式固液分離去除培養(yǎng)基中水及培養(yǎng)基組分中的物質(zhì)；

03、細(xì)胞洗滌

固液分離后收集細(xì)胞，可以用生理鹽水重懸細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行洗滌（工業(yè)上此工序可省略），保持細(xì)胞破碎時(shí)破碎的是純凈的細(xì)胞；

04、細(xì)胞重懸

細(xì)胞洗滌后，重懸細(xì)胞，重懸細(xì)胞要注意重懸緩沖液的種類(lèi)及和重懸后的細(xì)胞濃度，濃度影響后面破碎效率，緩沖液影響后續(xù)純化過(guò)程，盡量保持和下游工藝的合理銜接，避免置換緩沖液；

05、細(xì)胞破碎

重懸后可以用去污劑Tween20.Tween80.Triton X-100等破碎細(xì)胞，或者通過(guò)凍融的方式破碎細(xì)胞，破碎后可以測(cè)定病毒滴度，保證病毒全部釋放出來(lái)；

06、破碎液固液分離

破碎后再次離心固液分離，收集上清；

07、澄清

上清液在用微濾（GF）的方式進(jìn)行澄清處理（要特別注意澄清度，澄清度是影響后續(xù)層析填料及超濾（UF)膜組件使用壽命的關(guān)鍵因素之一），澄清度可以通過(guò)測(cè)濁度的方式檢測(cè)；

08、核酸酶處理

澄清后加入核酸酶處理，降解核酸降低粘度，考慮核酸酶活加入的量及酶處理時(shí)間，核酸酶處理時(shí)要緩慢攪拌，保證處理的均勻性；

09、緩沖液置換

用超濾膜組件進(jìn)行緩沖液置換，保證緩沖體系適合下一步層析過(guò)程，同時(shí)置換時(shí)也可以適當(dāng)濃縮，注意超濾時(shí)的跨膜壓及超濾時(shí)剪切力對(duì)病毒完整性的影響；若8工序后的樣品不影響粗純的層析過(guò)程（需要從細(xì)胞重懸工序開(kāi)始合理選擇緩沖液，及破碎方式的選擇考慮）此工序可省去；

10、粗純

減毒流感病毒載體新冠疫苗可用陰離子交換層析吸附——洗脫模式(大多數(shù)病毒在中性pH環(huán)境中都帶負(fù)電荷）進(jìn)行粗純及濃縮，推薦使用蘇州藍(lán)曉生物高剛性瓊脂糖微球陰離子交換填（Seplife large scale Q )，離子交換層析的過(guò)程，病毒被吸附在填料上，吸附的過(guò)程也會(huì)把病毒濃縮在填料上，蘇州藍(lán)曉生物的Seplife large scale Q填料吸附減毒流感病毒載體的載量在1-3mg/ml(與工藝緩沖液，層析時(shí)保留時(shí)間等有關(guān)），用陰離子交換層析吸附——洗脫模式粗純減毒流感病毒載體新冠疫苗時(shí)，可以運(yùn)用DOE，系統(tǒng)的表征各個(gè)層析工藝參數(shù)，達(dá)到最優(yōu)的純化結(jié)果（回收率和純度），減輕后續(xù)精純工序的壓力；

同時(shí)也可以用蘇州藍(lán)曉生物的混合模式層析介質(zhì)Seplife? Suncore 700來(lái)粗純，病毒顆粒被排阻在惰性層外流穿，HCP,HCD,內(nèi)毒素等雜質(zhì)進(jìn)入活性區(qū)域和介質(zhì)以靜電力，疏水作用力結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)分離。

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細(xì)胞培養(yǎng)微載體

Seplife? LX-MC-dex1

高剛性瓊脂糖微球陰離子交換介質(zhì)

Seplife large scale Q

高剛性高分辨率瓊脂糖微球陰離子交換介質(zhì)

Seplife large scale Q HP

多模式復(fù)合型層析填料

Seplife? Suncore 700

凝膠過(guò)濾層析填料

Seplife 4FF

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