抗體是一種由效應(yīng)B細(xì)胞分泌的免疫球蛋白，協(xié)助免疫系統(tǒng)鑒別、中和抗原或其他外來物質(zhì)。單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體。

21世紀(jì)隨著生物技術(shù)，分子克隆技術(shù)，細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及免疫治療，免疫學(xué)的快速發(fā)展，單克隆抗體也進(jìn)入了快速發(fā)展期，在腫瘤治療及免疫療法中單克隆抗體發(fā)揮極其重要的作用。

單克隆抗體制備工藝中，下游工藝占整個(gè)工藝成本的60%以上，下面系統(tǒng)全面的介紹單克隆抗體的下游工藝解決方案。

用于腫瘤治療及免疫療法的單克隆抗體工藝趨于成熟，人源或人源化的單抗，由CHO細(xì)胞培養(yǎng)分泌獲得。CHO細(xì)胞用蘇州藍(lán)曉生物科技的Seplife LX-MC-dex1微載體培養(yǎng)。微載體培養(yǎng)是目前公認(rèn)最具發(fā)展前途的一種動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)，其兼具懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)，且容易放大。藍(lán)曉科技的微載體廣泛應(yīng)用在疫苗、單抗、基因治療病毒載體等生物制品的大規(guī)模生產(chǎn)中，藍(lán)曉科技自主研發(fā)的Seplife LX-MC-dex1細(xì)胞培養(yǎng)微載體幾乎適合所有貼壁細(xì)胞（如Vero、CHO、293T及MDCK等），細(xì)胞可貼附微球 2D 表面生長(zhǎng)，1g的Seplife LX-MC-dex1微載體提供 4400 cm2的表面積給細(xì)胞貼附。

圖2：Seplife LX-MC-dex1細(xì)胞培養(yǎng)微載體培養(yǎng)效果

CHO細(xì)胞培養(yǎng)后先經(jīng)過離心的方式去除細(xì)胞及細(xì)胞碎片，也可用微濾或者深層過濾的方式去除細(xì)胞及細(xì)胞碎片。去除細(xì)胞和細(xì)胞碎片后用rProtein A親和層析介質(zhì)經(jīng)親和層析捕獲，把單抗從培養(yǎng)液中快速的捕獲出來，此步驟可以去除大量的HCP，單抗去折疊片段，病毒及HCD和培養(yǎng)基組份物質(zhì)。親和層析捕獲后，進(jìn)一步用強(qiáng)陽離子交換層析SP Seplife Large Scale層析介質(zhì)繼續(xù)純化捕獲的單抗，進(jìn)一步去除少量的HCP,HCD及第1步親和層析捕獲時(shí)rProtein A親和介質(zhì)脫離的親和配基rProtein A。強(qiáng)陽離子交換層析后，通過調(diào)pH的方式用pH3.7-3.8的環(huán)境進(jìn)行病毒滅活。低pH病毒滅活后，在通過陰離子交換層析Q Seplife Large Scale流穿模式，讓單抗流穿，層析介質(zhì)吸附痕量的雜質(zhì)進(jìn)一步純化。陰離子交換層析后，可以通過超濾的方式進(jìn)行濃縮。濃縮再用20nm的納濾膜過濾除病毒。除病毒后就進(jìn)入制劑階段。隨著技術(shù)和材料的發(fā)展，單抗下游工藝解決方案也呈現(xiàn)出多樣性。

圖3：?jiǎn)慰瓜掠喂に嚨亩鄻有?/span>

單抗下游純化工藝-經(jīng)典工藝

圖4：?jiǎn)慰瓜掠渭兓に嚱?jīng)典工藝過程

圖5：rProtein A親和介質(zhì)純化蛋白原理圖

Protein A是金黃色葡萄球菌表面的蛋白，分子量42kDa，有5個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域可以結(jié)合IgG的Fc片段，具有很強(qiáng)的特異性親和力，每個(gè)Protein A分子至少可以結(jié)合兩個(gè)IgG分子。

隨著技術(shù)的發(fā)展，重組Protein A在不斷的改進(jìn)，目前用于單抗捕獲的rProtein A多點(diǎn)和瓊脂糖微球等填料基質(zhì)偶聯(lián)，減少了使用過程中配基脫落，同時(shí)為滿足生物制藥工藝消毒的要求，可以耐受0.1-0.5M氫氧化鈉的處理。

圖6：rProtein A純化單抗的過程

圖7：rProteinA親和介質(zhì)連續(xù)流層析過程示意圖

Protein A親和層析捕獲工藝流程可參考上面圖片的工藝流程，同時(shí)我們要系統(tǒng)的設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，基于淋洗條件，洗脫方式，保留時(shí)間等要系統(tǒng)的利用DOE實(shí)驗(yàn)開發(fā)最佳工藝過程。

rProteinA Seplife Suno

性能參數(shù)

rProteinA Seplife Suno

載量與駐留時(shí)間的關(guān)系

rProteinA Seplife Suno

和國(guó)外品牌對(duì)比

rProteinA Seplife Suno

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CHO細(xì)胞培養(yǎng)微載體

Seplife LX-MC-dex1

親和介質(zhì)

rProtein A Seplife Suno

離子交換介質(zhì)

Q/SP Seplife Large Scale

混合模式層析介質(zhì)

MA Seplife Large Scale

凝膠過濾層析介質(zhì)

Seplife S-100/S-200

蘇州藍(lán)曉生物科技有限公司是藍(lán)曉科技（股票代碼：SZ 300487）全資子公司，依托藍(lán)曉科技20多年在分離吸附材料領(lǐng)域豐富的經(jīng)驗(yàn)和技術(shù)積累，在后疫情時(shí)代及藥品集采的時(shí)代背景下應(yīng)運(yùn)而生。蘇州藍(lán)曉生物科技，在藍(lán)曉科技雄厚資本的支持下，在藍(lán)曉科技生命科學(xué)事業(yè)部數(shù)10年產(chǎn)品研發(fā)和技術(shù)積累的基礎(chǔ)上，匯聚50多人的研發(fā)團(tuán)隊(duì)，提供從細(xì)胞培養(yǎng)及分離純化到系統(tǒng)裝置完整的解決方案，我們將全力助力生命科學(xué)及生物制藥產(chǎn)業(yè)的高質(zhì)量發(fā)展。