介質(zhì)的認(rèn)知

在層析過程之前我們要對(duì)層析介質(zhì)的耐壓性，化學(xué)穩(wěn)定性（如化學(xué)耐受性），物理穩(wěn)定性（如壓縮因子），保存條件，分離原理，材質(zhì)做足夠的認(rèn)識(shí)，避免不合適的層析過程影響填料的壽命衰減（如IDA-Ni應(yīng)避免接觸氧化劑還原劑和螯合劑)。如藍(lán)曉科技層析介質(zhì)認(rèn)識(shí)，我們需要了解不同的縮寫或者字母代表的是什么：

?Seplife :藍(lán)曉科技層析介質(zhì)商標(biāo)
?FF——Fast Flow ：6%高流速瓊脂糖微球，粒徑范圍45-165um,平均粒徑90um
?4FF——4Fasr Flow：4%高流速瓊脂糖微球，粒徑范圍45-165um,平均粒徑90um
?BB——Big Beads：6%大顆粒高流速瓊脂糖微球，粒徑范圍100-300um,平均粒徑200um
?HP——High Performance ,6%高分辨率，粒徑范圍25-44um，平均粒徑34um
?XL——6%高流速，高載量瓊脂糖微球，粒徑范圍45-165um,平均粒徑90um
?Large Scale ——大規(guī)模，高剛性瓊脂糖微球，粒徑范圍45-165um,平均粒徑90um
?Large Scale HP——高剛性高分辨率瓊脂糖微球，粒徑范圍25-44um，平均粒徑34um
?LS——Low Sub：低配基密度
?HS——High Sub: 高配基密度
?SF——Superfine :超細(xì)顆粒，葡聚糖微球，干粉粒徑20-50um
?F——Fine：細(xì)顆粒，葡聚糖微球，干粉粒徑20-80um
?M——Medium: 中等粒徑，葡聚糖微球，干粉粒徑50-150um
?C——Coarse: 粗粒徑，葡聚糖微球，干粉粒徑100-300um
?cm/h——線性流速（cm/h）=流速（ml/min）*60/層析柱半徑（cm）平方*圓周率（π）。

樣品的認(rèn)知

在層析過程要對(duì)樣品做足夠的認(rèn)知，包括樣品的濃度，樣品的組成等做一定的了解，如真核細(xì)胞分泌表達(dá)的樣品，要了解其上游工藝，培養(yǎng)基組成，培養(yǎng)過程等的一些添加劑是否對(duì)填料的性能及壽命衰減會(huì)有影響，及樣品的酸堿度，離子強(qiáng)度，濁度等做足夠的了解，必要的時(shí)候要進(jìn)行再次澄清處理及體系置換。

樣品的前處理

在了解完樣品的情況后，結(jié)合層析工藝，對(duì)樣品做適當(dāng)?shù)那疤幚?，可以有效降低介質(zhì)的壽命衰減。

?樣品中的顆粒物質(zhì)在層析前要進(jìn)行澄清處理，澄清處理的越徹底，對(duì)填料壽命衰減影響越小。

?樣品的粘度要盡量小，必要時(shí)候要加核酸酶處理，降低大片段核酸含量及粘度。

?樣品的組份應(yīng)滿足層析工藝且對(duì)填料的性能沒有影響，必要時(shí)可以用藍(lán)曉科技的凝膠過濾介質(zhì)Seplife G-25 M介質(zhì)對(duì)樣品進(jìn)行置換體系處理。

層析工藝過程

?優(yōu)化柱床高度使其既滿足工藝指標(biāo)，又可減少反壓

?優(yōu)化層析緩沖液使其對(duì)介質(zhì)壽命衰減的影響最?。ū热缦疵搹?qiáng)度的合理溫和可以降低配基的脫落和基質(zhì)的老化）。

?優(yōu)化層析過程減少非特異性吸附等也可以有效降低介質(zhì)壽命的衰減過程。

維護(hù)保養(yǎng)

不同的介質(zhì)及不同的污染物清洗方法不同，清洗既要保證清洗效果同時(shí)要減少對(duì)層析介質(zhì)的損傷，還要避免清洗試劑對(duì)介質(zhì)的二次污染，選擇合適的清洗方法非常重要。依據(jù)層析介質(zhì)的污染物的種類進(jìn)行清洗方法，關(guān)注此公眾號(hào)，下次分別介紹不同污染物清洗方法的選擇及介質(zhì)維護(hù)保養(yǎng)全過程。

清洗是去除再生沒有去除的污染物，那么我們就要了解污染物的來源，污染物與物料及工藝階段，工藝過程聯(lián)系緊密。

1）捕獲階段，物料通常比較復(fù)雜，含有大量的雜質(zhì)，色素，內(nèi)素素等，再生往往難以去除干凈，那么待清洗去除的物質(zhì)也很復(fù)雜，清洗過程也很復(fù)雜，可能需要多種模式配合作用，同時(shí)清洗的頻率和強(qiáng)度都要高。通常使用1個(gè)循環(huán)后就要清洗一次。

2）中度純化階段，物料已經(jīng)去除了大部分雜質(zhì)，通過再生殘留在介質(zhì)上的污染物就很少了，清洗過程和頻率比捕獲階段就要低很多。使用5-10個(gè)循環(huán)后就需要清洗一次。

3）精純階段，物料已很純凈，只含有微量的雜質(zhì)，再生通常就可以達(dá)到清洗的目的，此時(shí)清洗的頻率和強(qiáng)度就更低。根據(jù)小試確定的清洗需要開始的狀態(tài)進(jìn)行清洗。

清洗過程注意事項(xiàng)：

?清洗過程要綜合考慮污染物的類型及介質(zhì)的種類，清洗的同時(shí)要減少對(duì)介質(zhì)的損傷。

?清洗時(shí)通常需要多種方法組合使用，清洗過程并非是固定不變的。

?清洗試劑應(yīng)選擇純度高的試劑，避免二次污染。

?清洗之后要立即洗到中性保存。

?清洗狀態(tài)的確定及方法的確定要結(jié)合整個(gè)工藝過程。

?清洗之后要對(duì)清洗過程進(jìn)行驗(yàn)證，保證清洗目的實(shí)現(xiàn)，可通過測定載量，流速等介質(zhì)的性能指標(biāo)驗(yàn)證

層析設(shè)備的影響

層析柱的分布器，清洗死角，密封性，材質(zhì)和介質(zhì)及樣品及層析過程緩沖液的兼容性也會(huì)影響層析介質(zhì)的壽命。