每一種新思想形成的背后都在積極面對“死胡同”時失落;每一種新方法的產生也在處處留心每跨一步留下的腳印;就像不積跬步無以至千里,不積小流無以成江海,一點一點的走心勞動,時間會在某個點積累匯聚,來到你想要的時刻。
這篇文章的主角是蛋白純化親和層析技術,在此概述了蛋白純化親和吸附層析的原理、應用等,該技術同樣經過多年的慢慢演變過程,中間經歷了前人的經驗和智慧,才發展形成現在的一種技術,給予你的實驗,包括時間、經歷、探索、思維、心態,慢慢磨練,等待想要的實驗結果。
親和層析的原理
生物分子與親和層析介質上的配體通過共價鍵、范德華力、疏水力、靜電力等作用發生生物學專一性結合形成復合物,共價鏈接在載體表面的功能團配體上。蛋白質親和層析技術通過目標蛋白質與配體間通過特異性親和力吸附而達到分離純化的目的,具有生物專一性的特點,純化效率高。
親和層析是一種根據生物分子之間的特異相互作用來分離蛋白的層析方法,如酶和底物、受體和配體、抗體和抗原。這種作用是特異性的也是可逆的,通過這種可逆的結合和分離來達到蛋白純化的目的
親和層析介質的特點
?基于配體和分離物間的特異性親和作用,分離選擇性強,效果好,純化倍數高。
?能完成一步方法很難完成的分離,如變性和非變性的,功能不同的蛋白。
?通常一步純化就可達到>90%的純度
?速度快,操作簡單
金屬螯合親和層析介質
組氨酸(His)的殘基上帶有一個咪唑基團,可以和Ni2+,Co2+等過渡金屬離子形成配位鍵而選擇性的結合在金屬離子上,這些金屬離子能夠用螯合配體固定在層析介質上,因此帶有組氨酸標簽的蛋白在經過裝配了金屬離子的層析介質時可以選擇性的結合在介質上,而其他的雜質蛋白則不能結合或者僅能微弱結合。結合在介質上的HIS標簽蛋白可以通過提高緩沖液中的咪唑濃度進行競爭性洗脫,從而得到較高純度的HIS標簽蛋白。
同時半胱氨酸(Cys)的殘基上的巰基,色氨酸(Trp)的殘基上的吲哚基也可以Ni2+,Co2+等過渡金屬離子形成配位鍵而選擇性的結合在金屬螯合介質上。
金屬螯合親和層析介質
?Ni Seplife FF(IDA)
?Ni Seplife 6FF(NTA)
?Ni Seplife FF(TED)
?Ni Seplife HP(IDA)
?IMAC Seplife FF(IDA)
抗體純化親和層析介質
重組蛋白A可特異性與抗體的Fc區結合,用于單抗或多抗的分離純化,經過一步層析,就可從腹水,血清或培養液等樣品中得到高純度的抗體。
重組蛋白G可用于分離純化細胞培養液或細胞提取物中不同屬抗體或抗體的Fc片段,多位點活化偶聯減少了配體的泄露,用于IgG單克隆抗體的實驗室規模和工業化大規模純化,能迅速處理大體積樣品
相關親和介質
rProtein A Seplife Suni
rProtein A Seplife Suno
rProtein G Seplife 4FF
GST標簽蛋白純化親和層析介質
谷胱甘肽配基是通過12個原子連接臂偶聯到4%的高流速瓊脂糖層析介質上,這種偶聯使得介質對GST-tag融合蛋白和其他谷胱甘肽結合蛋白有更強的結合能力,介質的高蛋白載量和良好的流速性能使大規模生產簡單直接。
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Glutathione Seplife 4FF
質粒DNA純化親和層析介質
Plasmid Seplife LX層析介質是藍曉科技自主研發的一種新型高度交聯的親硫芳香族瓊脂糖層析介質,利用配基的嗜硫吸附,適用于分離純化閉環的超螺旋質粒DNA,廣泛應用于基因治療和DNA疫苗的開發應用。該層析介質具有高流速、低反壓、非特異性吸附低、良好的親水性、化學穩定性和機械性特點,方便進行規模放大,可縮短生產時間,提高生產效率。
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Plasmid Seplife LX
絲氨酸蛋白酶純化親和層析介質
苯甲脒類物質是絲氨酸蛋白酶的廣譜抑制劑,將這類物質偶聯到高流速瓊脂糖凝膠過濾層析介質上,可以從各種來源的樣品中進一步胰蛋白酶,凝血酶,尿激酶,激肽釋放酶,前激肽釋放酶等絲氨酸蛋白酶。
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Benzamidine seplife 4FF
肝素親和層析介質
肝素是一種含硫酸酯的酸性多糖,能和抗凝血因子Ⅲ,凝血因子,脂蛋白,干擾素,核酸結合蛋白,凝血酶及類凝血酶等生物大分子結合,將它偶聯到活化的交聯瓊脂糖介質上制備而成
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Heparin seplife CL-6B
Heparin seplife FF
硼酸親和層析介質
硼酸能和1,2順式二醇結合,所以硼酸瓊脂糖介質可以用于糖類,核苷,核酸,肽及酶類的分離純化,特別適合糖蛋白的分離純化。本產品將硼酸類化合物偶聯到活化的瓊脂糖凝膠4FF上,用于上述物質的分離純化
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Boricacid seplife 4FF
藍色染料親和層析介質
藍色染料親和介質是將藍色染料汽巴蘭偶聯到高流速瓊脂糖微球上的一種親和層析介質,該產品有很高的化學穩定性。其與目標蛋白的結合主要是配基提供的電子對與疏水作用的綜合結果,可適用于白蛋白,干擾素,凝血因子以及各種需要NAD+和NADP+的酶的分離純化。
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Blue Seplife FF
紅色染料親和層析介質
紅色染料親和介質是將活性紅120共價結合到高流速瓊脂糖凝膠微球上的一種親和層析介質,活性紅120是一個多環染料,與自然產生的NADP+具有某些結構的相似性,可以強烈并且特異性結合寬范圍的蛋白質,如乳酸脫氫酶。能與紅色染料特異性結合的蛋白是由于它們需要核苷酸輔助因子。其他一些蛋白,例如白蛋白,脂蛋白,凝血因子和干擾素,是以非特異性方式與紅色染料相結合的,如芳香環陰離子配基的靜電力相互作用或者疏水鍵的相互作用。
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Red Seplife FF
預活化介質
環氧活化層析介質是將環氧基團鍵合在瓊脂糖FF上形成的一種活性中間體,可直接偶聯配基制備各類分離介質,用于生物大分子純化分離。
溴化氫活化瓊脂糖層析介質是一種活化后的中間體,通過溴化氫和瓊脂糖上面的羥基反應生成活化的氰酸酯基團。蛋白質,多肽,氨基酸等可以偶聯到溴化氫活化4B/6B瓊脂糖介質上,應用較為廣泛。
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Epoxy Activated Seplife 4FF
CNBr Activated Seplife 4FF