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生物工藝中常用添加劑解析

2021-12-31 18:52:18

表一:蛋白質純化中用于增強蛋白質穩定性的常用添加劑。

TritonX -114

溫度在22℃以上時,在蛋白質溶液中加入2%的TritonX -114可使蛋白質從去垢劑相和液相中分離,可溶性蛋白在液相中,而膜蛋白則進入了去垢相中。(內毒素存在于細胞壁組分,菌裂解后釋出物中。)是生物工藝中去除內毒素最常用的萃取劑。在膜蛋白提取中應用廣泛。用量1%-2%

TritonX -100

具親水端和疏水端,可將膜蛋白從細胞膜上解離下來,達到提取膜蛋白的作用。常用的非離子性去垢劑。用量:1%-3% 

L-Arginine

增加蛋白質的溶解性,阻止蛋白質分子間通過疏水作用發生凝聚而產生沉淀。用量:0.4-0.6mol/L,用途廣泛,低溶解度生物常用的助溶劑。

DTT

常常被用于蛋白質中二硫鍵的還原,可用于阻止蛋白質中的半胱氨酸之間所形成的蛋白質分子內或分子間二硫鍵。但DTT往往無法還原包埋于蛋白質結構內部(溶劑不可及)的二硫鍵,這類二硫鍵的還原常常需要先將蛋白質變性(高溫加熱或加入變性劑,如6M鹽酸胍、8M尿素或1%SDS)。用量:1-2mM。

EDTA

螯合劑,消除微量重金屬導致的酶催化反應中的抑制作用。不影響蛋白質功能的情況下去除干擾金屬離子,但是同時能使金屬蛋白酶喪失活性。用量:0.1—5mmol/L。IDA/IMAC(NTA) 的Ni避免添加,若樣品中含有較高濃度的EDTA時,需要用金屬螯合親和層析純化時,推薦選擇蘇州藍曉生物的Ni Seplife FF(TED),此鎳填料可以耐受100mM的EDTA.

Glycerol

增加黏度,減少分子間的碰撞,用量:5%-30%。生物分子在保存時的常用添加劑,可以有效防止蛋白聚集沉淀。

SDS

能夠使蛋白質變性的陰離子型去污劑,用量:0.1%-1%。

Pepstatin

抑制酸性蛋白酶,配置時溶于甲醇中,在水中不溶解。用量:1ug/ml。Store at:-4℃(A week)/-20℃(Half a year)。

Leupeptin

抑制絲氨酸和巰基蛋白酶,配置時溶于水,用量:1ug/ml。Store at:-4℃(A week)/-20℃(Half a year)

其他:歡迎留言補充。



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