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常用基因治療病毒載體純化介質選擇指南

2022-06-07 15:14:46

01、基因治療

90年代早期,由French Anderson等領導的一項試驗也采用了一種離體治療方法,對腺苷脫氨酶缺乏癥嚴重聯(lián)合免疫缺陷病(ADA-SCID)患者,注射由攜帶ADA基因的重組逆轉錄病毒轉化的T細胞進行治療,這被認為是人類第一次成功的基因治療。基因治療(gene therapy)是指將外源正常基因導入靶細胞,以糾正或補償缺陷和異常基因引起的疾病,以達到治療目的。

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02、腺病毒載體

腺病毒載體自1993年首次被應用于臨床試驗以來,迄今為止大約有40%基因治療臨床試驗方案采用腺病毒為載體,僅次于RV載體_3?J。至今AV載體已經(jīng)發(fā)展了4代,第2、3代腺病毒去除EI、E2和E4編碼序列,與第一代相比,有更低的免疫原性和更大的載體容量。第四代腺病毒僅含有反向末端重復序列(1TRs)和包裝信號,載體容量達37kb,進一步降低了免疫原性,被稱為“高容量”載體。AV載體具有宿主范圍廣、基因轉移效率高、對非分裂細胞也有感染性、比較容易制備和操作、理化性質穩(wěn)定、遺傳毒性較低及比較安全等優(yōu)點。

腺病毒載體下游工藝過程,澄清的病毒溶液,先用陰離子交換層析Q Large Scale捕獲,在用多模式層析介質Seplife Suncore 700流穿模式精細純化,或者用超濾洗濾的方式濃縮,濃縮后用凝膠過濾層析介質Seplife 4FF純化。

腺病毒載體純化用介質推薦:

Q Large Scale 

Seplife Suncore 700

Seplife 4FF

Q Large Scale HP

Seplife LX-Q400 (400nm孔徑)

03、慢病毒載體

慢病毒屬逆轉錄病毒科,為二倍體RNA病毒,分為靈長類病毒如人類免疫缺陷病毒一1(HIV-1)、猴免疫缺陷病毒(SIV)和非靈長類病毒如馬傳染性貧血病毒(EIAV),但它與逆轉錄病毒不同,能感染非分裂細胞。

慢病毒載體下游純化工藝過程和腺病毒類似。

慢病毒載體純化用介質推薦:

Q Large Scale 

Seplife Suncore 700

Seplife 4FF

Q Large Scale HP

Seplife LX-Q400 (400nm孔徑)

04、腺相關病毒

腺病毒相關病毒(AAV)是一種缺陷型的單鏈DNA病毒,只有在輔助病毒如腺病毒、單純皰疹病毒、痘苗病毒等存在的情況下,才能進行最佳復制,產(chǎn)生新的病毒顆粒,否則只能進行潛伏感染。從v載體既可以轉染分裂細胞又可以轉染非分裂細胞,在宿主體內以定向整合的方式存在,70%?以上的整合位點位于第19號染色體q13.3-qter區(qū),且對人體無致病性,故AAv重組體在細胞內能長期穩(wěn)定地表達,還可避免隨機整合可能引起的抑癌基因失活和原癌基因激活的危險,且在體內不引起明顯的病理變化,表明AAV是一種很有前途的基因治療載體_9j。AAv載體在多種組織已進行了成功的轉染,如肝、腦、心肌、骨骼肌、視網(wǎng)膜和呼吸道上皮等組織,未發(fā)現(xiàn)對機體有致病性。

腺相關病毒相比慢病毒和腺病毒分子尺寸較小,在純化填料選擇上和腺病毒稍有區(qū)別。

腺相關病毒載體純化用介質推薦:

Q Large Scale

Seplife LXMS-15Q/30Q (去空殼病毒)

Seplife Suncore 400

Seplife 6FF

Q Large Scale HP

Seplife LX-Q400 (400nm孔徑)

Heparin Seplife FF(AAV2.AAV8親和層析)

05、單純皰疹病毒

單純皰疹病毒是一種雙鏈DNA病毒,作為基因治療載體具有以下優(yōu)點:①容納外源基因的長度達4o~50I,是目前容量最大的病毒載體。②?具嗜神經(jīng)性,可在神經(jīng)元中建立終生潛伏性感染,非常適用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病如帕金森病、Azheimer病等。③滴度高。④可感染分裂期和非分裂期細胞。

單純皰疹病毒載體純化用介質推薦:

Q Large Scale

Seplife Suncore 700

Seplife 4FF

Q Large Scale HP

Seplife LX-Q400 (400nm孔徑)

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