簡介

rProtein A Seplife Suno/Suni是藍曉科技應(yīng)對抗體客戶需求推出的Protein A親和層析填料，以球形，高交聯(lián)瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，通過自主創(chuàng)新技術(shù)將耐堿性重組蛋白A鍵合到該基質(zhì)上。可以特異性地與抗體的Fc區(qū)結(jié)合，用于抗體（單抗和多抗）的分離純化，只需一步親和層析，即可從腹水、血清或培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體。

使用設(shè)備及試劑

（1）使用設(shè)備：蛋白純化系統(tǒng)；

（2）填料：rProtein A Seplife Suni/Suno，裝柱體積1ml；

（3）批次：20211207201/20211208201；

（4）樣品：人免疫球蛋白IgG，上樣量根據(jù)實際情況而定，C=2mg/ml；

（5）流動相A1：20mM PBS+0.15M NaCl，pH7.4；

流動相B：0.1M檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，pH3.0；

實驗過程

DBC測試(不同駐留時間)

使用 AKTA pure層析系統(tǒng)編程進行實驗，設(shè)定檢測波長為280nm，deltaCp為0.3MPa，將層析柱接入系統(tǒng)，設(shè)定流速為1.0ml/min，用流動相B淋洗10cv，用流動相A1平衡15cv；上樣流速分別設(shè)置為0.33ml/min，0.25ml/min，0.2ml/min，0.16ml/min（駐留時間分別對應(yīng)3min，4min，5min，6min），上樣至280nm處吸收值為90 mAu；設(shè)定梯度洗脫流動相100%B，流速1.0ml/min，洗脫至基線平，收集洗脫液；最后，使用流動相A1再生10ml，流速1.0ml/min。

評價結(jié)果——不同駐留時間下載量及耐堿性

對藍曉兩款填料分別測試了不同駐留時間下的動態(tài)載量，結(jié)果如下：

表1 藍曉rProtein A Seplife Suni及Suno不同駐留時間下動態(tài)載量測試結(jié)果

圖1 藍曉rProtein A Seplife Suni不同駐留時間下動態(tài)載量測試結(jié)果

圖2 藍曉rProtein A Seplife Suno不同駐留時間下動態(tài)載量測試結(jié)果

圖3 藍曉rProtein A Seplife Suni及Suno不同駐留時間下動態(tài)載量測試結(jié)果

（1）同期動態(tài)載量用液相ProAqa Excel抗體親和分析色譜柱測定

（2）一般要求動態(tài)載量至少還有初始的70%以上

實驗結(jié)果

1.由上述結(jié)果可以看出，在不同保留時間下，藍曉兩款rProtein A填料的DBC（動態(tài)結(jié)合能力）數(shù)值都隨著駐留時間增加而增加，其中，5min的駐留時間與6min差異不大。

2.從上述結(jié)果來看，本次試驗中藍曉r-Protein A Seplife Suni在經(jīng)過100次0.5M NaOH循環(huán)后，動態(tài)載量還保持在初始的70%以上，耐堿性明顯高于外樣。