Red Seplife FF層析介質是藍曉科技自主研發的一種新型親和層析介質,它是將活性紅120共價結合到高流速瓊脂糖凝膠過濾層析介質上。活性紅120是一個多環染料,與自然產生的NADP+具有某些結構的相似性,可以強烈并且特異性的結合寬范圍的蛋白質,如乳酸脫氫酶。一般與紅色染料特異性結合的蛋白質是由于蛋白質需要核苷酸輔助因子。其他的一些蛋白,如白蛋白、脂蛋白、凝血因子和干擾素是以非特異性方式與紅色染料結合,如芳香環陰離子配基的靜電作用或者疏水鍵的相互作用。
產品牌號 | Red Seplife FF |
外觀 | 白色球狀,無臭無味 |
基質 | Seplife 6FF |
配基 | 活性紅120 |
最高流速(cm/h) | 750 |
粒徑(μm) | 45~165 |
配基密度(umol/ml) | 2 |
結合載量(mg/ml) | ≥3mg LDH /ml |
pH穩定性 | 3~13(長期);4~12(短期,在位清洗[CIP]) |
化學穩定性 | 在以下溶液中穩定:6M鹽酸胍;8M尿素;70%乙醇 |
應用 | 白蛋白、干擾素、凝血因子以及各種需要NAD+和NADP+的酶的分離 |
使用方法
3.1使用前清洗
存放過程中,染料由于水解會有極少量脫落,所以在使用前需先用1M NaCl 或著KCl清洗,然后用5倍柱床體積的平衡緩沖液(離子強度小于0.05M 的pH6-8)平衡。
3.2樣品預處理
樣品應當在平衡緩沖液中。當樣品緩沖液含有鹽時,應該先脫鹽處理或者進行稀釋。如果樣品仍然不能被吸附可以嘗試以下方法:
(1)降低流速。
(2)降低平衡液的pH。
(3)加入一些金屬離子(比如10mM的氯化鎂)。
(4)加入一些EDTA或者巰基乙醇。
3.3洗脫
(1)對于非特異性吸附,大部分蛋白一般用2M KCl或者3M NaCl就能洗脫下來。對于結合非常牢固的蛋白可以嘗試下面的洗脫液:4M 尿素,4.2M 硫酸銨,1M硫氰酸鈉,0.1 M氫氧化鈉,75%乙二醇,50-50%(v/v) 氯仿-甲醇。
(2)特異性吸附蛋白可以采用低濃度競爭洗脫、梯度或者線性洗脫。
3.4 再生
對于使用過的凝膠,先用2~3倍柱床體積的0.1mol/L Tris·HCl+0.5mol/L NaCl(pH8.5)和0.1mol/L NaAc+0.5mol/L NaCl(pH4.5)依次反復沖洗3~4次,然后用平衡緩沖溶液平衡。在一些應用中,變性蛋白或者一些脂類物質在再生步驟不會被洗脫掉,可以采用在位清洗(CIP)去除。
3.5在位清洗
(1)對于沉淀的蛋白,可以先用4倍柱床體積0.1M NaOH,流速40cm/h清洗,然后用3~4倍柱床體積70%乙醇或者2M硫氰酸鉀溶液清洗柱子,或者用6M鹽酸胍溶液清洗柱子。
(2)對于強吸附的疏水蛋白、脂蛋白和脂類,可以先用3~4倍柱床體積的70%乙醇或者30%異丙醇清洗,或者用2倍柱床體積的酸性或者堿性表面活性劑,流速40cm/h清洗,如1M乙酸含0.1%的非離子型去污劑。注意有機溶劑的濃度需要按梯度增加,否則容易產生氣泡。
(3)殘留的表面活性劑,用5倍柱床體積的70%乙醇去除。
(4)最后立即用至少5倍柱床體積的緩沖液平衡柱子(pH8.0)。
3.6存儲
保存在2~8℃,20%乙醇溶液中(含1M NaCl),干燥、通風、清潔處。避免與氧化劑接觸,不可冷凍。
3.7運輸
運輸中避免日曬、雨淋、重壓,嚴禁與有毒、有害物品混運。
注意事項
(1)樣品必須澄清沒有顆粒。
(2)樣品與層析介質必須用洗脫緩沖液徹底平衡后,才能進行柱層析。
(3)所裝的柱床必須表面平整,無溝流及氣泡,否則應重裝。
(4)洗脫過程中應嚴格控制流速,且勿過快。
(5)加樣及整個洗脫過程中,嚴防柱面變干。
(6)本品應避免與氧化劑接觸,避免長時間暴露在空氣中。
產品牌號 | 貨號 | 包裝規格 |
Red Seplife FF | A4203202 | 25ml |
A4203203 | 100ml | |
A4203204 | 500ml | |
A4203205 | 1L | |
A4203206 | 5L | |
A4203207 | 10L |
生產日期:見標簽
使用期限:在適當的貯藏條件下可貯藏5年
注冊人名稱/生產企業:西安藍曉科技新材料股份有限公司
注冊人住址/生產地址:西安市高新開發區錦業路135號藍曉科技園
售后服務單位:西安藍曉科技新材料股份有限公司
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