Seplife? LXMS 50HQ是以多聚物為基架的強陰離子交換介質,與傳統的瓊脂糖層析介質相比可在高壓力與高流速下進行操作,使用時反壓低,便于線性放大,穩定性良好。同時該層析介質具有高的耐鹽性、高分辨率、高且穩定的蛋白結合載量能力,可減少純化過程中稀釋過程,減少透析與超濾換液的操作步驟,提高工藝靈活性,便于上下游純化工藝銜接,廣泛用于單克隆抗體、重組蛋白、疫苗、血液制品、病毒、DNA以及多肽類產品的分離和純化。
產品牌號 | Seplife? LXMS 50HQ |
外觀 | 白色不透明球狀顆粒,無臭無味 |
種類 | 強陰離子交換填料 |
基質 | 聚苯乙烯 二乙烯苯 |
配基 | 季胺基 |
d50v(μm) | 50 |
壓力流速*(cm/h) | 200-800 |
pH穩定性 | 2~12(長期),1~14(短期,在位清洗[CIP]) |
化學穩定性 | 所有常用的離子交換緩沖液 |
離子交換量(mmol /ml) | 0.13-0.17 |
動態載量(mg/ml) | ≧70(BSA) |
最大耐壓(bar) | 30 |
*檢測條件:層析柱16mm×200mm;*柱床高10cm;溫度25℃;流動相為0.1mol/L NaCl
使用方法
3.1 裝柱
勻漿濃度等于靜置膠體積除以除以勻漿后的總體積。采用0.5M NaCl勻漿可獲得最佳裝柱效果,其濃度為60%-70%。方法如下:
1)色譜柱的柱體積 V,V=Ac×L,Ac=π×r2。
Ac:色譜柱橫截面積;L:色譜柱高度;r:色譜柱半徑。
2) 攪動介質形成勻漿液,量取所需質量或體積。其為柱體積的1.2倍左右,防止收縮。
3)用 0.5 M NaCl 溶液置換20%乙醇,平衡過夜。
4)裝柱之前,用 0.5 M NaCl 溶液調整勻漿濃度為 65 ~ 70%;將勻漿一次性倒入層析柱,沉降平衡后標注高度。
5)將分配器裝入,調節高度使得壓縮系數為 1.05 ~ 1.10;然后啟動輸液泵,用 1.5~2 倍工作流速使柱床穩定。
6)按照 SOP 進行柱效和對稱性的測定,須達到預定標準。
3.2 柱效評價
裝好之后,色譜柱用3-5體積超純水清洗。100cm/h流速平衡并進行柱效測試。
離子交換層析柱的柱效測試方法
樣品: 2 M NaCl 溶液
上樣量: 1~5 % 柱體積
洗脫液: 0.5 M NaCl 溶液
線性流速: 100 cm/h
檢測: UV @ 280 nm ,2 M NaCl 上樣:電導檢測儀
3.3 清洗
裝好的色譜柱應使用至少使用5BV的去離子水清洗。
3.4 平衡
使用適當的5-10倍柱體積緩沖液進行柱子的平衡,至流出液電導和PH不變(與平衡液一致),緩沖液 如 Buffer A,如 20 mM PBS, pH7.0,具體的緩沖體系應根據目標蛋白的穩定性和等電點、離子交換介質的種類進行篩選和優化。
3.5上樣
固體樣品可用平衡液溶解配制;低濃度樣品溶液可用平衡液透析;高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱,樣品應經離心或膜過濾處理。進料量根據介質的載量和料液中目標蛋白的含量計算,上樣前確保樣品緩沖液應盡可能與平衡液一致。
3.6洗脫
上樣完畢后繼續用平衡緩沖液淋洗至基線穩定,可以根據實際情況采取提高鹽濃度或改變流動相 pH 的方法依次洗脫吸附于層析介質上的樣品。
3.7再生
每次層析之后可用0.5-2 M NaCl 清洗層析柱,除去強結合于層析介質上的蛋白。
3.8 在位清洗
為了保持層析柱的性能,若有蛋白質或其他雜質在再生過程中未能有效去除,可執行在位清洗步驟,在位清洗時,也可采用反向沖洗的方法,具體操作步驟如下:
(1)對于通過離子鍵結合過強的蛋白,可用3BV以上的2M NaCl 清洗,并用3BV以上的去離子水清洗;
(2)對沉淀蛋白、以疏水性結合的蛋白或脂蛋白,可用0.2~0.5 M NaOH 清洗(與層析介質接觸時間 1~2 h),并用5BV以上平衡液和3BV以上的去離子水清洗;
(3)對強疏水性結合的蛋白、脂蛋白和脂類物質,可用5BV以上的50%乙醇或 30%異丙醇清洗(與層析介質接觸時間0.5-1 h),并用5 BV以上的去離子水清洗。也可用含非離子表面活性劑的堿性或酸性溶液清洗,如0.1~0.5%的 Triton X-100 + 0.1 M乙酸清洗 1-2 h,并用5BV以上的50%乙醇沖洗去除去污劑,然后用5BV以上的純水沖洗(使用高濃度的有機溶劑時,為了避免產生氣泡,應采用逐步增加有機溶劑濃度的方法)。
4.存儲
暫時不使用的層析介質需保存在 4~30 ℃ 的 20%乙醇中,已經裝好的層析柱應保存在含 20%乙醇的緩沖液(pH 7.0);使用前請裝柱后將乙醇清洗干凈。
5.運輸
運輸中避免日曬、雨淋、重壓,嚴禁與有毒、有害物品混運。
產品牌號 | 貨號 | 包裝規格 |
Seplife? LXMS 50HQ | PS30325X(50)1-1 | 25ml |
PS30325X(50)1-2 | 100ml | |
PS30325X(50)1-3 | 500ml | |
PS30325X(50)1-4 | 1L | |
PS30325X(50)1-5 | 5L | |
PS30325X(50)1-6 | 10L |
生產日期:見標簽
使用期限:在適當的貯藏條件下可貯藏5年
注冊人名稱/生產企業:西安藍曉科技新材料股份有限公司
注冊人住址/生產地址:西安市高新開發區錦業路135號藍曉科技園
售后服務單位:西安藍曉科技新材料股份有限公司
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