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那曲Seplife? LXPM-Ni5504 IDA C

基本信息

Seplife? LXPM-Ni5504 IDA C層析介質(zhì)是以聚丙烯酸酯為基質(zhì),在表面進(jìn)行了親水性改性再偶聯(lián)螯合基團(tuán)制成,具有親水性好、高載量、分辨率高、非特性吸附小,物理化學(xué)穩(wěn)定等特點(diǎn)。Seplife? LXPM-Ni5504 IDA廣泛應(yīng)用于分離純化能被金屬離子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及帶His 標(biāo)簽的重組蛋白。
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Seplife? LXPM-Ni5504 IDA C層析介質(zhì)是以聚丙烯酸酯為基質(zhì),在表面進(jìn)行了親水性改性再偶聯(lián)螯合基團(tuán)制成,具有親水性好、高載量、分辨率高、非特性吸附小,物理化學(xué)穩(wěn)定等特點(diǎn)。Seplife? LXPM-Ni5504 IDA廣泛應(yīng)用于分離純化能被金屬離子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及帶His 標(biāo)簽的重組蛋白。

性能介紹


骨架

聚甲基丙烯酸甲酯

外觀

淡藍(lán)色不透明球狀顆粒

功能基團(tuán)

Ni2+

D50v粒度(μm)

200

孔徑(?)

1000

載量(mg/ml介質(zhì))

≧18mg His蛋白

離子結(jié)合量(Ni2+ umol/ml)

~55

耐壓流速(cm/h)

800-1000  22mm×20cm,3bar

壓縮因子≦1.05

最大耐壓(MPa)

0.5

pH穩(wěn)定范圍

2-13

存儲(chǔ),防腐劑

20%乙醇溶液,150mol/l NaCl

穩(wěn)定性

在常用水相溶液中穩(wěn)定:0.1M氫氧化鈉;8M尿素(24h);6M鹽酸胍(24h),1M NaOH(24h),5mM DTT(24h)


使用方法

3.1 裝柱

勻漿濃度等于靜置膠體積除以除以勻漿后的總體積。采用0.5M NaCl勻漿可獲得最佳裝柱效果,其濃度為60%-70%。方法如下:

1)色譜柱的柱體積 V,V=Ac×L,Ac=π×r2。

Ac:色譜柱橫截面積;L:色譜柱高度;r:色譜柱半徑。

2) 攪動(dòng)介質(zhì)形成勻漿液,量取所需質(zhì)量或體積。其為柱體積的1.2倍左右,防止收縮。

3)用 0.5 M NaCl 溶液置換20%乙醇,平衡過夜。

4)裝柱之前,用 0.5 M NaCl 溶液調(diào)整勻漿濃度為 65 ~ 70%;將勻漿一次性倒入層析柱,沉降平衡后標(biāo)注高度。

5)將分配器裝入,調(diào)節(jié)高度使得壓縮系數(shù)為 1.05 ~ 1.10;然后啟動(dòng)輸液泵,用 1.5~2 倍工作流速使柱床穩(wěn)定。

6)按照 SOP 進(jìn)行柱效和對(duì)稱性的測定,須達(dá)到預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)。

3.2 柱效評(píng)價(jià) 

裝好之后,色譜柱用3-5體積超純水清洗。100cm/h流速平衡并進(jìn)行柱效測試。

離子交換層析柱的柱效測試方法

樣品:      2 M NaCl 溶液

上樣量:    1~5 % 柱體積

洗脫液:    0.5 M NaCl 溶液

線性流速:  100 cm/h

檢測:      UV @ 280 nm,2 M NaCl 上樣:電導(dǎo)檢測儀

3.3 清洗

裝好的色譜柱應(yīng)使用至少使用5BV的去離子水清洗。

3.4 平衡

使用適當(dāng)?shù)?-10倍柱體積緩沖液進(jìn)行柱子的平衡,至流出液電導(dǎo)和PH不變(與平衡液一致),具體的緩沖體系應(yīng)根據(jù)目標(biāo)蛋白特性及穩(wěn)定性進(jìn)行篩選和優(yōu)化。

3.5上樣 

固體樣品可用平衡液溶解配制;低濃度樣品溶液可用平衡液透析;高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱,樣品應(yīng)經(jīng)離心或膜過濾處理。進(jìn)料量根據(jù)介質(zhì)的載量和料液中目標(biāo)蛋白的含量計(jì)算,上樣前確保樣品緩沖液應(yīng)盡可能與平衡液一致。此外,還需注意以下事項(xiàng):

(1)樣品一般溶解于pH6~8的初始緩沖液中,提高上樣緩沖液的pH值可以增大載量。

(2)緩沖液中不能含有EDTA和檸檬酸鹽,同時(shí)最好避免巰基乙醇、DTT等還原劑。

(3)常用緩沖液有10~100mmol/L磷酸鈉緩沖液、20~200mmol/L Tris-HCl緩沖液等。

(4)緩沖液中一般要加入0.15~0.5mol/L的NaCl以消除離子交換作用。

3.6洗脫 

上樣完畢后繼續(xù)用平衡緩沖液淋洗至基線穩(wěn)定,可以根據(jù)實(shí)際情況采取以下幾種方法洗脫吸附于層析介質(zhì)上的樣品:

(1)降低pH洗脫:大多數(shù)蛋白在pH 4~6會(huì)被洗脫下來(也可以在pH 3~4),緩沖液可以是醋酸鈉、檸檬酸和磷酸鹽緩沖體系。

(2)競爭性洗脫:線性增加或一步增加同金屬離子有親和力的競爭物質(zhì)的濃度(如0~0.5mol/L咪唑、0~50 mmol/L組氨酸、0~2mol/L NH4Cl)。

(3)螯合劑洗脫:EDTA、EGTA 等螯合劑可同金屬離子產(chǎn)生作用力會(huì)使蛋白被洗脫下來。但是此法不能分離不同的蛋白,會(huì)影響蛋白的吸附,導(dǎo)致融合蛋白無法掛柱。

備注:(1)初次使用時(shí),如不確定洗脫需要的咪唑濃度,推薦在初始緩沖液中分別加入10mmol/L、20mmol/L、50mmol/L、100mmol/L、200mmol/L、500mmol/L咪唑,濃度從低到高分別洗脫和收集重組蛋白,之后通過SDS-PAGE電泳等方法鑒定洗脫結(jié)果。

(2)咪唑?yàn)閴A性,相應(yīng)緩沖液配制后需要用HCl調(diào)節(jié)pH值。

(3)降低pH洗脫和螯合劑洗脫會(huì)使金屬離子脫落,下次使用前需重新螯和金屬離子。

(4)有條件的可以進(jìn)行咪唑梯度線性洗脫以確定較佳的洗脫條件。

上述洗脫方法,均須在緩沖液中加入150~500mmol/L的NaCl以消除離子交換作用。

3.7再生 

(1)多次使用后或需要更換螯合的金屬離子時(shí),必須將凝膠脫鎳再生。脫鎳方法:首先用5~10個(gè)柱床體積的蒸餾水淋洗柱子,然后用5~10個(gè)柱床體積的100mmol/L EDTA淋洗柱子,最后用2~3個(gè)柱床體積的0.5mol/L NaCl洗掉殘留的EDTA。

(2)多次使用的柱子脫鎳后一般需要清洗。清洗方法:用0.1~1.0 mol/L NaOH反向清洗柱子,50 cm/h保持1~2 h,不僅可以去除結(jié)合強(qiáng)的雜質(zhì),也可以去除熱源。

(3)清洗后需要重新螯合金屬離子。螯合方法:首先用2~5個(gè)柱床體積的蒸餾水充分平衡脫鎳后的柱子,然后用0.1~0.3mol/L金屬鹽溶液過柱5~10個(gè)柱床體積以螯合金屬離子,最后用5~10個(gè)柱床體積的蒸餾水淋洗以去除未螯合的金屬離子。

3.8 在位清洗 

為了保持層析柱的性能,若有蛋白質(zhì)或其他雜質(zhì)在再生過程中未能有效去除,可執(zhí)行在位清洗步驟,具體操作步驟如下:

(1)去除因離子交換作用吸附的蛋白:用2mol/L NaCl溶液反向清洗2~3個(gè)柱床體積。

(2)去除強(qiáng)疏水性蛋白和脂質(zhì)等:用70%乙醇或者30%異丙醇反向清洗4個(gè)柱床體積。

(3)除去沉淀蛋白、疏水性蛋白:參照凝膠再生步驟。

4.存儲(chǔ)

暫時(shí)不使用的層析介質(zhì)需保存在 4~30 ℃ 的 20%乙醇中,已經(jīng)裝好的層析柱應(yīng)保存在含 20%乙醇的緩沖液(pH 7.0);使用前請裝柱后將乙醇清洗干凈。

5.運(yùn)輸

運(yùn)輸中避免日曬、雨淋、重壓,嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。


產(chǎn)品牌號(hào)

貨號(hào)

包裝規(guī)格

Seplife? LXPM-Ni5504 IDA C

PM521024C1-1

25ml

PM521024C1-2

100ml

PM521024C1-3

500ml

PM521024C1-4

1L

PM521024C1-5

5L

PM521024C1-6

10L

生產(chǎn)日期:見標(biāo)簽

使用期限:在適當(dāng)?shù)馁A藏條件下可貯藏5年

注冊人名稱/生產(chǎn)企業(yè):西安藍(lán)曉科技新材料股份有限公司

注冊人住址/生產(chǎn)地址:西安市高新開發(fā)區(qū)錦業(yè)路135號(hào)藍(lán)曉科技園

售后服務(wù)單位:西安藍(lán)曉科技新材料股份有限公司

郵政編碼:710076

聯(lián)系電話:86-29-8110 4050

傳真:029-8669 1600-8254

官方網(wǎng)站:www.sunresin.com

注冊人名稱/銷售企業(yè):蘇州藍(lán)曉生物科技有限公司

注冊人地址/銷售地址:蘇州市區(qū)工業(yè)園區(qū)裕新路108號(hào)5樓525室

聯(lián)系電話:0512-65160522


標(biāo)簽

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